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学习情境一 核酸提取与鉴定1

子情境一 基因组DNA提取技术2

引言2

工作任务2

信息获取2

一、基因组DNA提取方法2

二、基因组DNA提取常见问题及处理方案14

工作实施16

检查与评价16

分析与思考16

拓展与链接17

子情境二 总RNA提取技术17

引言17

工作任务19

信息获取19

一、RNA提取方法20

二、生物材料的获取21

三、仪器设备的使用22

四、应用举例——华美生物工程公司的总RNA提取系统（Ⅰ）23

五、RNA提取常见问题及处理方案26

工作实施27

检查与评价27

分析与思考27

拓展与链接28

子情境三 DNA/RNA浓度测定与纯度检测28

引言28

工作任务29

信息获取30

一、核酸检测的常用方法30

二、仪器设备的使用30

三、应用举例31

四、通过OD260/OD280比值判定样品纯度常见问题及处理方案34

工作实施34

检查与评价35

分析与思考35

拓展与链接35

学习情境二 基因克隆36

子情境一 引物的设计与合成37

引言37

工作任务37

信息获取37

一、待扩增序列核苷酸信息的获取37

二、资料解读43

三、引物设计遵循的原则46

四、引物设计47

五、应用举例——引物稀释58

工作实施59

检查与评价61

分析与思考62

拓展与链接62

子情境二 基因扩增、检测与纯化63

引言63

工作任务64

信息获取64

一、PCR技术64

二、PCR结果检测72

工作实施78

检查与评价78

分析与思考78

拓展与链接80

子情境三 连接技术82

引言82

工作任务85

信息获取85

一、载体85

二、限制性核酸内切酶91

三、连接酶110

四、目的基因与载体的体外连接112

工作实施117

检查与评价118

分析与思考118

拓展与链接124

子情境四 外源基因导入受体细胞125

引言125

工作任务125

信息获取126

一、受体细胞126

二、重组DNA导入受体细胞的方法127

三、应用举例132

工作实施136

检查与评价137

分析与思考137

拓展与链接140

子情境五 转化体的筛选与鉴定142

引言142

工作任务143

信息获取143

一、转化体筛选和鉴定方法143

二、应用举例147

三、转化体筛选与鉴定中出现的常见问题及处理方案150

工作实施150

检查与评价151

分析与思考151

拓展与链接151

学习情境三 基因表达152

子情境一 重组表达体系的构建152

引言152

工作任务153

信息获取153

一、外源基因在大肠杆菌中表达的调控元件154

二、原核表达载体的类型157

三、宿主菌对表达产物的影响160

工作实施161

检查与评价162

分析与思考162

拓展与链接164

子情境二 目的基因的表达与表达产物的检测165

引言165

工作任务165

信息获取166

一、提高外源基因表达的措施166

二、蛋白质的分离纯化和活性鉴定166

三、应用举例——聚丙烯酰胺凝胶电泳173

工作实施176

检查与评价176

分析与思考176

拓展与链接177

学习情境四 基因操作相关应用179

子情境一 基因信息分析技术179

引言179

工作任务180

信息获取180

一、生物信息数据库与查询182

二、序列比对和数据库搜索184

三、核酸与蛋白质结构和功能的预测分析187

四、实际应用——DNAman软件的使用189

工作实施193

分析与思考193

拓展与链接193

子情境二 分子标记技术194

引言194

工作任务195

信息获取195

一、以分子杂交为基础的分子标记技术（hibridisation-based markers）195

二、以PCR反应为基础的分子标记技术（PCR-based markers）197

三、以核苷酸序列为基础的分子标记技术（sequencing-based markers）201

四、应用举例——随机扩增多态性DNA202

工作实施204

检查与评价204

分析与思考204

拓展与链接205

子情境三 基因芯片技术206

引言206

工作任务208

信息获取209

一、基因芯片概述209

二、微阵列芯片的制备209

三、应用举例——大肠杆菌（Escherichia coli）和野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris,Xcc）的鉴别214

工作实施220

分析与思考220

拓展与链接222

附录224

附录一 基因组DNA提取技术224

附录二 总RNA提取技术233

附录三 DNA/RNA浓度测定与纯度检测241

附录四 引物的设计与合成249

附录五 基因扩增、检测与纯化255

附录六 连接技术263

附录七 外源基因导入受体细胞271

附录八 转化体的筛选与鉴定279

附录九 重组表达体系的构建287

附录十 目的基因的表达与表达产物的检测293

附录十一 分子标记技术299

参考文献305