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目录1

第1章　柱花草研究进展1

1.1　柱花草的重要性1

1.2　柱花草炭疽病2

1.2.1　柱花草炭疽病的主要危害2

1.2.2　柱花草炭疽病病原菌的遗传多态性及流行性研究2

1.3　柱花草抗炭疽育种进展4

1.3.1　收集柱花草种质资源培育抗病品种4

1.3.2　引种选育4

1.3.6　转基因抗病育种5

1.3.5　细胞工程育种5

1.3.4　杂交育种5

1.3.3　辐射育种5

1.4　柱花草生物学研究6

1.4.1　柱花草细胞遗传学研究6

1.4.2　柱花草细胞生物学研究7

1.5　柱花草生物技术研究7

1.5.1　柱花草组织培养7

1.5.2　柱花草的原生质体融合7

1.5.3　柱花草基因克隆7

1.5.4　柱花草遗传转化8

1.5.5　柱花草分类及其分子标记8

参考文献9

2.1　引言14

第2章　柱花草种质对炭疽病病原菌的反应14

2.2.1　供试材料15

2.2　材料与方法15

2.2.2　炭疽病病原菌16

2.2.3　植株接种试验16

2.2.4 离体叶片接种试验17

2.3　结果17

2.3.1 不同柱花草种质对2种类型病原菌的反应17

2.3.2 不同柱花草种质的离体叶片对胶孢炭疽菌CATAS100的反应评价19

2.3.3　感病与抗病柱花草种质感病参数比较21

2.3.4　感病与抗病种质病斑扩展比较21

2.3.5　盆栽植株与离体叶片对胶孢炭疽菌抗性的差异21

2.4.3　柱花草的抗炭疽病机制23

2.5　小结23

2.4　讨论23

2.4.2　抗炭疽病柱花草种质23

2.4.1 柱花草炭疽病原菌的危害23

参考文献24

第3章　感病与抗病柱花草遗传多样性的RAPD分析25

3.1 引言25

3.2　材料与方法26

3.2.1　供试材料26

3.2.2　主要实验仪器26

3.2.6　酶和DNA标准分子量27

3.2.5　培养基27

3.2.7　菌种和克隆载体27

3.2.4　化学试剂27

3.2.3　RAPD引物27

3.2.8　柱花草DNA的提取28

3.2.9　柱花草RAPD反应体系的建立29

3.2.10　RAPD数据分析29

3.2.11 RAPD特异性片段克隆30

3.3　结果32

3.3.1 柱花草RAPD反应体系的建立32

3.3.2　RAPD多态性分析34

3.3.3　聚类分析34

3.3.4　多重对应分析35

3.3.5　RAPD特异性片段的克隆及其分析38

3.3.6　SG907-1的氨基酸序列同源性比较分析40

3.4　讨论40

3.4.1 RAPD扩增的优缺点及克服缺点的措施40

3.4.2　RAPD聚类分析可靠性42

3.4.3　SG907-1的克隆42

3.5　小结42

参考文献43

第4章　应用微卫星标记分析柱花草的遗传多样性45

4.1 引言45

4.2.4　SSR分析46

4.2.3　柱花草DNA提取46

4.2.5　数据分析46

4.2.1　供试材料46

4.2　材料与方法46

4.2.2　主要实验仪器46

4.3　结果47

4.3.1　柱花草的微卫星多态性47

4.3.2　品系内的遗传变异49

4.3.3　聚类分析50

4.3.4　抗病与感病柱花草品系在聚类树系图中的分布50

4.4　讨论51

4.4.1　SSR技术分析的效果及其与RAPD结果比较51

4.4.2　柱花草种质的遗传多样性及其应用52

4.4.3　SSR技术的优点52

4.5　小结52

参考文献53

5.1 引言54

第5章　感病与抗病柱花草遗传多样性的AFLP分析54

5.2　材料与方法56

5.2.1　供试材料56

5.2.2　化学试剂56

5.2.3　菌种和克隆载体57

5.2.4　主要实验仪器57

5.2.5 柱花草DNA提取57

5.2.6　AFLP反应57

5.2.7　AFLP特异性片段的克隆60

5.2.8　数据分析61

5.3　结果61

5.3.1　预扩增效果61

5.3.2　引物对筛选61

5.3.3　AFLP多态性分析62

5.3.4　聚类分析63

5.3.5　主成分分析64

5.3.6　AFLP特异性片段的克隆及其分析66

5.3.7　AFLP特异性片段氨基酸序列同源性比较分析67

5.4　讨论68

5.4.1 AFLP扩增反应特点68

5.4.2　AFLP分析的效果68

5.4.3 圭亚那柱花草品系的遗传多样性70

5.4.4　AFLP特性片段的鉴定及其利用70

5.5　小结70

参考文献71

6.1 引言73

第6章　感病与抗病柱花草核rDNA的ITS1序列分析73

6.2　材料与方法74

6.2.1　供试材料74

6.2.2　引物和酶74

6.2.3　菌种和克隆载体74

6.2.4　基因组总DNA提取74

6.2.5　ITS1扩增74

6.2.6　ITS1片段回收74

6.2.7　连接和转化74

6.2.8　转化子鉴定及克隆测序75

6.2.9　ITS1序列分析75

6.3　结果75

6.3.1　ITS1序列长度及变异75

6.3.3　遗传分化系数76

6.3.2　聚类分析76

6.3.4　ITS1序列的限制性酶切位点分析83

6.4　讨论84

6.4.1 应用ITS1分析柱花草种质的变异84

6.4.2　柱花草种子ITS1序列比对84

6.4.3　基于ITS1的柱花草种子聚类分析84

6.5　小结85

参考文献85

第7章　几丁质酶基因转化柱花草并选育抗炭疽病植株的研究87

7.1 引言87

7.2　材料与方法88

7.2.1　研究材料88

7.2.4　大肠杆菌质粒制备89

7.2.5　土壤农杆菌质粒制备89

7.2.3　土壤农杆菌转化89

7.2.2　大肠杆菌转化89

7.2.6　几丁质酶基因植物表达载体的构建90

7.2.7　几丁质酶的体外抑制胶孢炭疽菌活性鉴定90

7.2.8　柱花草组织培养90

7.2.9　卡那霉素抑制分化与再分化的浓度筛选91

7.2.10　水稻几丁质酶基因转化柱花草91

7.2.11 GUS活性检测91

7.2.12　分子检测92

7.2.13　转基因柱花草植株胶孢炭疽菌接种及发病评价92

7.3　结果92

7.3.1 几丁质酶基因植物表达载体构建92

7.3.3　质粒pCAMBIACH2转化土壤农杆菌LBA440493

7.3.2　几丁质酶基因在大肠杆菌中的表达及其在体外的抑直菌活性93

7.3.4　柱花草组织培养94

7.3.5　卡那霉素抑制柱花草愈伤组织分化与再分化的浓度97

7.3.6　转化植株的获得98

7.3.7　GUS活性检测98

7.3.8　NPTII基因的PCR检测99

7.3.9　转化频率100

7.3.10　Southern杂交分析100

7.3.11　转基因柱花草植株对胶孢炭疽菌侵染的反应100

7.4　讨论101

7.5　小结102

参考文献102

8.2　材料与方法105

8.2.1　材料105

第8章　热研7号柱花草的选育105

8.1 引言105

8.2.2　方法106

8.3　结果与分析107

8.3.1　品种特征特性107

8.3.2　品种比较试验结果107

8.3.3　区域性试验结果108

8.3.4　生产试验结果109

8.3.5　适宜推广区域110

8.3.6　主要用途110

8.4　结论111

参考文献111

8.3.7　栽培技术要点111

第9章　柱花草种子生产研究112

9.1 引言112

9.2　分布地区、种植面积及总产量112

9.3　种子生产的适宜区域113

9.4　主要栽培品种的产量与质量114

9.5　种子生产的栽培管理技术115

9.5.1 育苗115

9.5.2　移栽115

9.5.3 田间管理115

9.5.4　收种116

9.6　价格及经济效益116

参考文献117

9.7　种子生产存在的问题117

9.8　建议117

第10章　柱花草种子超干贮藏研究118

10.1 引言118

10.2　材料与方法118

10.2.1　材料119

10.2.2　研究方法119

10.3　结果120

10.3.1 常温贮藏柱花草种子的最佳含水量120

10.3.2　柱花草种子超干贮藏对活力的影响120

10.3.3　超干贮藏对种子生理生化的影响122

10.4　讨论124

参考文献124