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第一部分　分子生物学技术的基础理论1

第一章　核酸的分离制备1

一、核酸分离制备的总原则1

二、核酸提取的主要步骤1

三、制备核酸时应注意的问题1

四、核酸提取2

五、核酸沉淀3

六、核酸定量4

七、核酸保存4

一、蛋白质分离纯化的一般原则5

第二章　蛋白质的分离纯化5

二、蛋白质分离纯化的主要方法6

三、蛋白质纯度鉴定与含量测定9

第三章　电泳技术10

一、基本原理10

二、影响电泳迁移率的因素10

三、核酸电泳的指示剂与染色剂11

四、不同波长紫外线对EB-DNA复合物的影响12

第四章　核酸分子杂交13

一、基本原理13

二、探针的种类13

三、探针的标记方法14

四、核酸分子杂交的基本方法15

五、常见的放射性核素标记物的比较16

第五章　放射自显影术17

一、放射自显影术的基本原理17

二、放射自显影的特点17

三、放射自显影的应用18

第六章　PCR技术19

一、PCR技术的基本原理19

二、PCR主要相关技术19

三、PCR技术在医学中的主要应用21

二、检测的基本过程23

三、生物芯片的类型23

第七章　简介生物芯片技术23

一、基本概念23

四、生物芯片技术在医学领域中的应用25

第八章　流式细胞术27

第一节　流式细胞术的基本原理27

第二节　流式细胞仪的分类和基本构造28

第三节　流式细胞仪的主要技术指标38

第四节　流式细胞仪应用的技术要求39

第五节　流式细胞仪在医学研究中的应用46

实验一　细菌的培养与收集51

第二部分　分子生物学实验的基本方法51

实验二　质粒DNA的提取54

实验三　人外周血白细胞DNA的提取59

实验四　哺乳动物细胞基因组DNA的提取62

实验五　真核细胞总RNA的制备65

实验六　真核细胞mRNA的提取70

实验七　核酸的定量73

实验八　DNA的限制性内切酶消化法76

实验九　琼脂糖凝胶电泳法检测DNA79

实验十　聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测DNA81

实验十一　STR的检测方法85

实验十二　低熔点琼脂糖凝胶回收DNA片段88

实验十三　DNA分子的体外连接90

实验十四　感受态细胞的制备及转化93

实验十五　重组质粒的筛选97

实验十六　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量101

实验十七　等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点105

实验十八　Western印迹法检测表达蛋白108

实验十九　免疫荧光法检测重组蛋白114

实验二十　放射免疫沉淀法检测重组蛋白117

实验二十一　RT-PCR-微孔板杂交-ELISA法检测基因表达121

实验二十二　DNA片段的印迹杂交125

实验二十三　RNA片段的印迹杂交130

实验二十四　放射性核素32P随机引物延伸标记法136

实验二十五　光敏生物素标记DNA法139

实验二十六 地高辛标记DNA探针141

实验二十七 乙型肝炎病毒的检测方法143

实验二十八 RT-PCR法检测HCV RNA148

实验二十九 PCR-SSCP分析152

实验三十 apoE多态性分析157

实验三十一 凋亡细胞梯状条带电泳161

实验三十二 流式细胞术检测细胞周期及DNA倍体分析164

附录一　分子生物学实验中常用参数及试剂的配制167

一、常见的市售酸碱167

第三部分　附录167

二、常用的缓冲液168

三、常用酶的配制173

四、常用贮存液的配制175

五、杂交实验中封闭剂的配制与用途178

六、放射性核素数据179

七、常用物理系数及分子量标准180

八、细菌培养基和抗生素183

九、中国汉族等位基因频率表184

附录二　分子生物学的重要知识点188

一、名词理解188

二、简答题196